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細胞培養常用試劑
點擊次數:1533 更新時間:2016-01-08

(一)pH調整液

    合成培養液大多呈弱酸性,而細胞生長的zui適pH值為7.0~7.2,因此使用培養液時要調整pH,并注意培養過程中pH的變化,及時換液。常用的pH調整液包括NaHCO3溶液和Hepes緩沖液。

1.NaHCO3溶液NaHCO3是培養基中必須添加的成分,一般情況下按照說明書要求添加,以保證培養基在5%CO2的環境中pH達到設計標準。通常情況下,培養液添加血清后可能偏酸,可臨時用NaHCO3溶液調節其pH值。常用的NaHC3溶液濃度為7.4%、5.6%、3.7%三種。調節pH時,NaHCO3溶液要逐滴加入,并不時搖動培養液,以防止加入過量。若pH過高時,可用高壓滅菌10%醋酸溶液或通人CO2氣體調節。配制時用三蒸水溶解后,過濾除菌,分裝備用。亦可使用高壓蒸氣滅菌,密封,4℃冰箱保存。

2.Hepes緩沖液是一種可以保持細胞培養過程中pH值較長時間穩定的氫離子緩沖劑。一般在克隆化培養時要添加H印es緩沖液。通常使用濃度為10~15mmol/L。配制時,稱取所需的Hepes,用培養液溶解后,用1mmol/L NaOH調節pH到7.O,過濾除菌分裝后備用。

(二)抗生素液

    細胞培養中經常使用的抗生素是青,俗稱“雙抗溶液”,可以預防絕大多數的細菌污染。使用的終濃度為100U/ml,為100μg/ml。常用Hanks或PBS配制為100倍濃縮液.分裝凍存,使用前經稀釋后加入到培養液中。

(三)補充液

    在細胞代謝過程中起重要作用,合成培養基中都要添加。易降解,應在使用前添加。常配制100倍濃度的濃縮液,濃度為200mmol/L。使用時,每lOOml培養液中加入0.5~2ml濃縮液,終濃度為1~4mmol/L。

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