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犬(VE)ELISA試劑盒組織結構及操作步驟
點擊次數:1096 更新時間:2019-07-17

犬(VE)ELISA試劑盒組織結構:

1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心35分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心60分鐘去除顆粒。

3、細胞上清液:1000×g離心32分鐘去除顆粒和聚合物。

4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心33分鐘,取上清液。

5、保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

犬(VE)ELISA試劑盒操作步驟:

標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,依次進行稀釋數倍。

加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

配液:將30倍(48T 的20 倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

溫育:操作同3。

洗滌:操作同5。

顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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